1、Mirus廣譜DNA轉(zhuǎn)染試劑TransIT®-LT1、TransIT®-2020和TransIT-X2®三者的區(qū)別是什么?

2、TransIT®-LT1轉(zhuǎn)染試劑的主要成分是什么?

3、TransIT®-2020轉(zhuǎn)染試劑的主要成分是什么？

4、TransIT®-2020適用于轉(zhuǎn)染哪些細(xì)胞？

5、ransIT-X2® Dynamic Delivery System的主要成分是什么？

6、TransIT-X2® Dynamic Delivery System和PEI（Polyethyeleneimine）是類似的東西嗎？

7、TransIT-X2®可用于貼壁和懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染嗎？

8、TransIT-X2®可以轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞嗎？

9、TransIT-X2®可以轉(zhuǎn)染神經(jīng)細(xì)胞嗎？

10、抗生素會影響轉(zhuǎn)染試劑的作用嗎？

11、如何優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率？

12、轉(zhuǎn)染結(jié)果不理想時該怎么辦？

1、Mirus廣譜DNA轉(zhuǎn)染試劑TransIT®-LT1、TransIT®-2020和TransIT-X2®三者的區(qū)別是什么?

TransIT®- LT1、TransIT®-2020和TransIT-X2®都是高效的廣譜轉(zhuǎn)染試劑，但它們的化學(xué)性質(zhì)不同，三者特點(diǎn)見下表。TransIT-X2是首選用于高效基因表達(dá)及敲除的廣譜轉(zhuǎn)染試劑。TransIT-X2能高效地轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA和siRNA，也可用于二者共轉(zhuǎn)。TransIT®-LT1和TransIT®-2020僅適用于質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染。TransIT®-2020和TransIT-X2®都是無動物源成分配方，因此可滿足有條件限制的應(yīng)用需求，例如藥物開發(fā)等。對于不同的細(xì)胞類型，不同轉(zhuǎn)染試劑表現(xiàn)效果也有所不同，因此對于不同細(xì)胞類型的具體應(yīng)用，可以參考我們的轉(zhuǎn)染試劑推薦方案數(shù)據(jù)庫Reagent Agent。（https://www.mirusbio.com/tech-resources/transfection-database）

*注：目的基因敲除也可以通過轉(zhuǎn)染編碼shRNA的質(zhì)粒DNA來實(shí)現(xiàn)，但該方法敲除基因不如siRNA/miRNA高效。

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2、TransIT®-LT1轉(zhuǎn)染試劑的主要成分是什么?

TransIT®-LT1是一種非脂質(zhì)體的廣譜轉(zhuǎn)染試劑，主要配方是由脂質(zhì)及蛋白/聚胺混合物組成。它是市面上第一款脂類/聚合物復(fù)合配方轉(zhuǎn)染試劑，同時具備高轉(zhuǎn)染效率和低細(xì)胞毒性特征。

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3、TransIT®-2020轉(zhuǎn)染試劑的主要成分是什么？

TransIT®-2020是一種專利的脂類-聚合物混合配方轉(zhuǎn)染試劑，可與DNA形成多聚物脂復(fù)合物。TransIT®-2020配方中不含任何動物源成分。

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4、TransIT®-2020適用于轉(zhuǎn)染哪些細(xì)胞？

TransIT®-2020是廣譜轉(zhuǎn)染試劑，適用于轉(zhuǎn)染多種類型細(xì)胞。

· 細(xì)胞系，包括貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞（例如HepG2, MCF-7, Neuro-2a，K562，Jurkat等）點(diǎn)擊右側(cè)鏈接可以查看適用TransIT®-2020轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系類型View a complete listing of cell lines transfected using TransIT®-2020 (PDF)，

· 原代細(xì)胞和干細(xì)胞View a complete listing of primary and stem cells transfected using TransIT®-2020 (PDF)。

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5、TransIT-X2® Dynamic Delivery System的主要成分是什么？

TransIT-X2® Dynamic Delivery System是一種先進(jìn)的非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，由一種全新型聚合物搭配Mirus專利配方，更容易與核酸形成復(fù)合物，適用于質(zhì)粒DNA與小分子核酸如siRNA、miRNA、pre-miRNA等的高效轉(zhuǎn)染。此外，TransIT-X2®還能實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒DNA與siRNA共轉(zhuǎn)染。TransIT-X2®配方中不含任何動物源成分。

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6、TransIT-X2® Dynamic Delivery System和PEI（Polyethyeleneimine）是類似的東西嗎？

不是的。TransIT-X2®是一種全新的聚合物配方，并非基于PEI的改良產(chǎn)品。

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7、TransIT-X2®可用于貼壁和懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染嗎？

可以。經(jīng)測試，我們已經(jīng)用TransIT-X2成功轉(zhuǎn)染過多種貼壁細(xì)胞（如CHO-K1，HepG2，原代人乳腺上皮細(xì)胞等）和懸浮細(xì)胞（如Freestyle 293-F等）。

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8、TransIT-X2®可以轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞嗎？

可以。TransIT-X2®適用于轉(zhuǎn)染多種原代細(xì)胞，我們已經(jīng)測試過HUVECs，原代人乳腺上皮細(xì)胞（HMEC）以及正常人皮膚成纖維細(xì)胞（NHDF）等原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率都不錯。

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9、TransIT-X2®可以轉(zhuǎn)染神經(jīng)細(xì)胞嗎？

可以。我們測試過iCell® Neurons, SH-SY5Y, SK-N-MC and PC-12等神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率都很不錯。點(diǎn)擊右側(cè)鏈接可以查看適用TransIT-X2®轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型以及推薦用量。View a complete listing of cell types transfected using TransIT-X2® by Mirus scientists and corresponding starting reagent-to-nucleic acid ratios. (PDF)

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10、抗生素會影響轉(zhuǎn)染試劑的作用嗎？

某些抗生素如卡那霉素是陽離子，會抑制轉(zhuǎn)染試劑/核酸形成復(fù)合物，因此我們建議在轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物形成這一環(huán)節(jié)不要使用抗生素。待轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物形成后，我們就可以加入到含有低水平抗生素的完全細(xì)胞培養(yǎng)基里了（例如將100×青-鏈霉素雙抗稀釋到0.1-1×工作濃度的細(xì)胞培養(yǎng)基）。

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11、如何優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率？

1）      轉(zhuǎn)染時的細(xì)胞密度 (%) ：大多數(shù)細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度最好能達(dá)到40%-80%，但是不同類型細(xì)胞有其最佳的轉(zhuǎn)染密度，在優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率時要先確認(rèn)細(xì)胞的最佳轉(zhuǎn)染密度；

2）      轉(zhuǎn)染試劑與DNA比例：轉(zhuǎn)染試劑與DNA的使用比例通常是1-4ul每1ugDNA，不同細(xì)胞可根據(jù)實(shí)際轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行不同配比的優(yōu)化；

3）      DNA質(zhì)粒的質(zhì)量：轉(zhuǎn)染用的DNA必須是無菌，高濃度，且去除內(nèi)毒素的質(zhì)粒。Mirus有一款內(nèi)毒素去除試劑盒（MiraCLEAN® Endotoxin Removal Kit，貨號MIR5900/MIR5910）可以去除質(zhì)粒中殘存的內(nèi)毒素；

4）      轉(zhuǎn)染試劑與核酸形成復(fù)合物要在無血清的培養(yǎng)基中進(jìn)行：血清可能會干擾轉(zhuǎn)染試劑與核酸形成復(fù)合物，因此在配置轉(zhuǎn)染試劑與核酸復(fù)合物時需要用無血清、無抗生素的培養(yǎng)基，而將復(fù)合物加入細(xì)胞的時候，細(xì)胞培養(yǎng)基里是可以含血清的。

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12、轉(zhuǎn)染結(jié)果不理想時該怎么辦？

Mirus每款轉(zhuǎn)染試劑的說明書最后都有TROUBLESHOOTING GUIDE，可以幫助客戶對照結(jié)果查找問題原因，大部分轉(zhuǎn)染不理想的問題都可以通過優(yōu)化操作步驟來解決，因此每一個使用Mirus轉(zhuǎn)染試劑的客戶，都應(yīng)在轉(zhuǎn)染前認(rèn)真閱讀產(chǎn)品說明書。

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